科研試劑盒實驗中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑盒以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：
（1）　ELISA實驗包被緩沖液
（2）　ELISA實驗洗滌緩沖液（2）　ELISA實驗洗滌緩沖液
（3）　ELISA實驗稀釋液;
（4）ELISA實驗終止液
（5）ELISA底物緩沖液
（6）ELISA實驗TMB
（四甲基聯苯胺）使用液
（7）　ELISA實驗ABTS使用液
（8）ELISC。

試劑

（1）　ELISA實驗包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:

NaHCO3 1.59克

NaHCO3　 2.93克

加蒸餾水至1000ml

（2）　ELISA實驗洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M

KH2PO4 　　　　 　0.2克

Na2HPO4·12H2O　　2.9克

NaCl　　　　　 　　8.0克

KCl　　　　　　　 　0.2克

Tween-20　0.05%　 0.5ml

加蒸餾水至1000ml

（3）　ELISA實驗稀釋液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

加洗滌緩沖液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

（4）　 ELISA試劑盒 實驗終止液（2M　H2SO4）：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

（5）　ELISA底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

0.2M Na2HPO4（28.4克/L） 25.7ml

0.1M 檸檬酸（19.2克/L）　　　　　 24.3ml

加蒸餾水50ml。

（6）　ELISA實驗TMB（四甲基聯苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml無水乙醇） 0.5ml

底物緩沖液（PH5.5）　　　 10ml

0.75%H2O2 32μl

（7）　ELISA實驗ABTS使用液:

ABTS　　　　　　　　0.5mg

底物緩沖液（PH5.5）　 1ml

3%H2O2 2μl

（8）ELISA實驗封閉液：

牛血清白蛋白（BSA） 5克

加洗滌緩沖液至100ml。

值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

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為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。